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2.1 野外采集结果
采集卵孢侧耳野生标本2份, 分离纯化, 获得野生菌株2份:采集号ZRL20152036 (馆藏号HMAS279131) 、分离菌株 (保藏号CGMCC13698) ;采集号ZRL20152015 (馆藏号HMAS279132) 、分离菌株 (编号ZRL20162237) 。
2.2 鉴定结果
2.2.1 形态学特征:
野生担子果单生 (图1) , 人工栽培条件下多簇生 (图2) , 鲜菇有海鲜气味, 菇蕾期菌盖小而菌柄粗, 浅灰色 (图2A) , 2–5d后菌盖圆盘形, 扁平或凹, 深灰色, 直径1.3–3.5cm (图2B) , 担子果成熟过程中, 菌盖中部或近中部逐渐下凹, 形成杯状或扇形, 中央浅黄褐色, 边缘灰褐色, 有波状起伏的卷边, 直径为4–12cm (图2C、2D) , 湿度大时菌盖表面粘质状, 空气干燥时, 菌盖干、开裂。菌褶1–3mm, 延生不等长, 中等稀疏, 白色至淡黄色, 孢子印白色。菌柄棒状, 近基部稍细1.5–7.5×0.5–1.5cm, 侧生, 少中生, 表面白色至浅棕色, 有纵纹, 菌柄基部有短绒毛, 象牙白色, 菌柄菌肉稍有韧性。在PDA培养基上, 菌落白色 (图3A) 。担孢子6.4–8.6×3.7–4.9μm, 长宽比为1.5–2.0, 椭圆形至卵圆形, 无色 (图3B) 。担子13–24×5.5–7.5μm, 棒状, 小梗4个, 小梗长2–3.5μm (图3C、3D) 。褶缘囊状体担子状, 侧生囊体无。
图1 野生卵孢侧耳Pleurotus placentodes A:HMAS279131;B:HMAS279132.标尺=2cm Fig.1 Basidiomes of wild Pleurotus placentodes.A:HMAS279131;B:HMAS279132.Bars=2cm.
图1 野生卵孢侧耳Pleurotus placentodes A:HMAS279131;B:HMAS279132.标尺=2cm Fig.1 Basidiomes of wild Pleurotus placentodes.A:HMAS279131;B:HMAS279132.Bars=2cm. 下载原图
图2 人工栽培卵孢侧耳Pleurotus placentodes不同生长时期的形态A–D:HMAS255159Fig.2 Basidiome morphology of Pleurotus placentodes at different stages of growth.A–D:HMAS255159.
图2 人工栽培卵孢侧耳Pleurotus placentodes不同生长时期的形态A–D:HMAS255159Fig.2 Basidiome morphology of Pleurotus placentodes at different stages of growth.A–D:HMAS255159. 下载原图
图3 卵孢侧耳Pleurotus placentodes的菌落及显微形态特征A:培养性状;B:担孢子;C:担子 (野生) ;D:担子 (栽培) Fig.3 The colony and microcosmic morphology of Pleurotus placentodes.A:Culture;B:Basidiospores;C:Basidia (from a wild collection) ;D:Basidia (from a cultivated strain) .
图3 卵孢侧耳Pleurotus placentodes的菌落及显微形态特征A:培养性状;B:担孢子;C:担子 (野生) ;D:担子 (栽培) Fig.3 The colony and microcosmic morphology of Pleurotus placentodes.A:Culture;B:Basidiospores;C:Basidia (from a wild collection) ;D:Basidia (from a cultivated strain) . 下载原图
2.2.2 分子系统学研究结果:
来自野生标本 (HMAS279131) 、菌株CGMCC 13698及人工驯化的子实体 (HMAS255159) 的ITS序列均一致 (Gen Bank收录号分别为KY967596、KY967597、KY967598) , 且根据构建的侧耳属系统发育图谱, 它们与已报道的卵孢侧耳 (Menolli et al.2014) 在一个系统发育分支里, 并获得0.99的后验概率支持率, 研究结果支持它们为同一物种, 即卵孢侧耳 (图4) 。
图4 基于ITS1‐5.8S‐ITS2序列贝叶斯分析的侧耳属系统发育树其中序列KY967596来自野生标本HMAS279131;序列KY967597来自野生标本的菌株CGMCC 13698;序列KY967598来自人工驯化后的菇体, 标本号为HMAS255159Fig.4 Phylogeny of Pleurotus species based on ITS1‐5.8S‐ITS2 sequence using Bayesian analysis.The sequences KY967596, KY967597 and KY967598 were generated respectively from the wild specimen HMAS279131, the wild strain CGMCC 13698, and the cultivated fruiting body (HMAS255159) respectively.
图4 基于ITS1‐5.8S‐ITS2序列贝叶斯分析的侧耳属系统发育树其中序列KY967596来自野生标本HMAS279131;序列KY967597来自野生标本的菌株CGMCC 13698;序列KY967598来自人工驯化后的菇体, 标本号为HMAS255159Fig.4 Phylogeny of Pleurotus species based on ITS1‐5.8S‐ITS2 sequence using Bayesian analysis.The sequences KY967596, KY967597 and KY967598 were generated respectively from the wild specimen HMAS279131, the wild strain CGMCC 13698, and the cultivated fruiting body (HMAS255159) respectively. 下载原图
2.3 驯化栽培
菌丝在9cm培养皿上6–7d长满, 原种在温度为24–26℃、相对湿度50%–60%条件下30d长满;栽培种在温度为18–22℃、相对湿度75%–80%条件下32d左右长满袋;长满7d后将白天温度设置为18℃, 夜晚温度为10℃, 进行温差刺激3d;然后再将温度设置回白天温度22℃, 夜晚温度18℃, 同时将相对湿度设置在85%–90%之间, 3–8d后原基形成;形成菇蕾后加大通风和湿度管理, 2–5d即可出菇进行采摘。驯化栽培研究表明, 卵孢侧耳菌株可以在以棉籽壳为主料的培养料上正常生长发育, 原种接种30d长满, 栽培种接种约32d左右长满袋, 长满后一周低温刺激原基分化, 原基分化后1周开始出菇, 从接种到出菇需要80–95d。
